マイクロプレート用 培地3成分測定キット ( D-グルコース・L-乳酸・L-グルタミン )

マイクロプレートリーダーを用いて
グルコース・乳酸・グルタミンを迅速に定量できます。

・調製済みの溶液タイプでそのまま使用可能

・迅速、簡便な操作

▷グルコース、乳酸は1ステップ・10分

▷グルタミンは2ステップ・20分

・室温で測定、加温不要

セット内容

写真：培地3成分測定キット

内容

・D-グルコース測定用試薬

グルコース試薬 A液 10 mL

グルコース試薬 B液 10 mL

D-グルコース標準液(10 mmol/L) 1.5 mL

・L-乳酸測定用試薬

乳酸試薬 A液 10 mL

乳酸試薬 B液 10 mL

L-乳酸標準液(10 mmol/L) 1.5 mL

・L-グルタミン測定用試薬

グルタミン試薬 A液 10 mL

グルタミン試薬 B液 10 mL

L-グルタミン酸標準液(10 mmol/L) 1.5 mL

・リザーバー 4個

・マイクロプレート(96穴) 5枚

測定回数

各100回

使用目的

試料中のD-グルコース、L-乳酸、L-グルタミンの測定

保存条件

冷蔵(2-8℃)

販売価格

99,000円(税込・送料別)

使用期限

納品後6か月

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注意事項

  • グルタミン試薬は測定手順が異なるので注意してください。
  • 試薬は、冷蔵庫(2-8℃)で保管してください。
  • 測定する際は、試薬を室温に戻してから使用してください。
  • 本測定法はエンドポイント法ですが、反応時間を正確に管理することで、より精度の高い測定が可能です。
  • 推奨する測定波長は555nm ですが、540 ～ 570 nm の範囲でも測定が可能です。
  • 試料中に含まれるフェノールレッドは、15 mg/L以下の濃度であれば測定に影響を与えません。
  • L-グルタミン測定時の共存L-グルタミン酸は5 mmol/Lまで許容します。

測定原理

D-グルコース測定

A液及びB液中の酵素により、D-グルコースから化学量論的に一定の割合で色素が生成する。

α-D-Glucose Mutarotase β-D-Glucose
β-D-Glucose + O2 Glucose oxidase D-Glucono-δ-lactone + H2O2
2H2O2 + 4-Aminoantipyrine + TOOS Peroxidase Quinoneimine dye + 4H2O
L-乳酸測定

A液及びB液中の酵素により、L-乳酸から化学量論的に一定の割合で色素が生成する。

L-Lactate + O2 Lactate oxidase Pyruvate + H2O2
2H2O2 + 4-Aminoantipyrine + TOOS Peroxidase Quinoneimine dye + 4H2O
L-グルタミン測定

Step1 :A液中の酵素により、試料中に共存するL-グルタミン酸を除去する。

L-Glutamate + O2 + H2O L-Glutamate oxidase 2-Oxoglutarate + NH3 + H2O2
2H2O2 Catalase 2H2O + O2

Step2 :B液中の酵素により、L-グルタミンから化学量論的に一定の割合で色素が生成する。

L-Glutamine + H2O Glutaminase L-Glutamate + NH3
L-Glutamate + O2 + H2O L-Glutamate oxidase 2-Oxoglutarate + NH3 + H2O2
2H2O2 + 4-Aminoantipyrine + TOOS Peroxidase Quinoneimine dye + 4H2O

試料の調製

D-グルコース測定 / L-乳酸測定

試料はD-グルコースまたはL-乳酸濃度が0.05 ～ 2.5 mmol/L の範囲になるよう調製する。

L-グルタミン測定

試料はL-グルタミン濃度が0.05～2.5 mmol/L 、L-グルタミン酸濃度が5 mmol/L 未満の範囲になるよう調製する。

標準液の調製(全ての測定に共通)

D-グルコース測定 / L-乳酸測定 / L-グルタミン測定

各測定キットに付属している標準液(10 mmol/L)を希釈して使用する。なお、L-グルタミン測定にはL-グルタミン酸標準液を用いる。

  1. ① 10 mmol/L 標準液 100 µLを純水300 µLで希釈し、2.5 mmol/L標準液を調製する。
  2. ② 10 mmol/L 標準液 100 µLを純水400 µLで希釈し、2 mmol/L標準液を調製する。
  3. ③ 10 mmol/L 標準液 75 µLを純水425 µLで希釈し、1.5 mmol/L標準液を調製する。
  4. ④ 2 mmol/L標準液を純水で順次2倍希釈し、1、0.5、0.25、0.125 mmol/L標準液を調製する。
  5. ⑤ 0 mmol/L標準液には純水を使用する。

測定手順

D-グルコース測定 / L-乳酸測定

D-グルコース測定とL-乳酸測定は同一手順。

① 必要量の試薬A液とB液を1：1で混合する。

(1ウェルあたりの必要量は各100 µLずつ)

※混合液は保存せず調製当日中に使いきること。

【参考】試薬調製量 24ウェル 48ウェル 96ウェル
試薬 A液 2.6 mL 5 mL 10 mL
試薬 B液 2.6 mL 5 mL 10 mL
  1. ② 標準液と試料をそれぞれ10 µLずつ各ウェルに入れる。
  2. ③ 試薬混合液200 µLを添加し、室温で10分間反応させる。
  3. ④ プレートリーダーにて555 nmの吸光度を測定する。
  4. ⑤ 標準液の濃度と吸光度より検量線を得る。試料中の測定対象物質濃度を検量線より算出する。
L-グルタミン測定
重要！

標準液にはL-グルタミン酸を使用しているため標準液と試料の測定手順が異なるので注意すること。

  1. ① 標準液と試料をそれぞれ10 µLずつ各ウェルに入れる。
  2. ② 標準液のウェルに試薬B液100 µLを、試料のウェルに試薬A液100 µLを添加し、室温で10分間反応させる。
  3. ③ 標準液のウェルに試薬A液100 µLを、試料のウェルに試薬B液100 µLを添加し、室温で10分間反応させる。
  4. ④ プレートリーダーにて555 nmの吸光度を測定する。
  5. ⑤ 標準液の濃度と吸光度より検量線を得る。試料中のL-グルタミン濃度を検量線より算出する。
参考データ
添加回収率(%)
培地 DMEM RPMI DMEM+FBS RPMI+FBS
D-Glc 95.998.195.595.9
L-Lac 95.797.292.891.4
L-Gln 99.698.495.094.8

DMEM: Dulbecco's Modified Eagle's Medium

RPMI: RPMI-1640

FBS: Fetal Bovine Serum(10%添加)

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